中检院关于公开征求《化妆品中铜绿假单胞菌的检验方法（征求意见稿）》等2项化妆品标准意见的通知

时间： 2026-07-22 作者：国家药监局来源：

导读：各有关单位：
为进一步完善化妆品技术标准，中检院组织制定了《化妆品中铜绿假单胞菌的检验方法》等2项化妆品标准制修订项目征求意见稿（附件1—2），现公开征求意见。请按要求在“化妆品标准制修订管理系统”（h

各有关单位：
为进一步完善化妆品技术标准，中检院组织制定了《化妆品中铜绿假单胞菌的检验方法》等2项化妆品标准制修订项目征求意见稿（附件1—2），现公开征求意见。请按要求在“化妆品标准制修订管理系统”（https://www.nifdc.org.cn/nifdc/bshff/hzhpbzh/hzhpbzhxt/index.html）中反馈意见，截止时间为2026年8月30日。
附件：1.《化妆品中铜绿假单胞菌的检验方法（征求意见稿）》及起草说明
2.《化妆品中乙醇等40种原料的检验方法（征求意见稿）》及起草说明
中检院
2026年7月21日

 附件1
化妆品中铜绿假单胞菌的检验方法（征求意见稿）
Detection of Pseudomonas aeruginosa in Cosmetics
1 范围
本规范规定了化妆品中铜绿假单胞菌的检验方法。
本规范适用于化妆品中铜绿假单胞菌的检验。
2 定义
2.1铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa
属于假单胞菌属，为革兰氏阴性杆菌，氧化酶阳性，在42±1 ℃条件下能生长。大部分能产生绿脓菌素。
3 菌种

序号	菌株名称	菌株编号*	菌株来源
1	铜绿假单胞菌	CMCC(B)10104	中国医学细菌保藏管理中心

注：用于适用性试验和检验过程中的质量控制。
*可使用其他菌种保藏机构的等效标准菌株。
4 设备和材料
4.1 恒温培养箱：36±1 ℃、42±1 ℃。
4.2 三角瓶：150 mL、200 mL、250 mL。
4.3 试管：18 mm×150 mm。
4.4 灭菌平皿：直径90 mm。
4.5 灭菌刻度吸管：1 mL(具0.01 mL刻度）、10 mL(具0.1 mL刻度）或者相应的可调量程移液器及配套灭菌吸头。
4.6 显微镜。
4.7 载玻片。
4.8 接种针、接种环。
4.9 电磁炉。
4.10 高压灭菌器。
4.11 恒温水浴箱。
4.12 天平。
4.13 pH计或pH试纸。
5 培养基和试剂
5.1 SCDLP液体培养基。
见总则附录A.1。
5.2 假单胞菌琼脂基础培养基（CN琼脂）。
成分：明胶蛋白胨   16.0g
胰蛋白胨      10.0g
硫酸钾     10.0 g
氯化镁 1.4 g
甘油   10 mL
溴化十六烷基三甲铵    0.2 g
萘啶酮酸 0.015g
琼脂      15 g
蒸馏水       1000 mL
pH   7.1±0.2
制法：将明胶蛋白胨、胰蛋白胨、硫酸钾、氯化镁加到蒸馏水中，加热使其溶解，加入琼脂和10 mL甘油，煮沸至完全溶解，121 ℃高压灭菌15 min。待培养基冷却至45~50 ℃时，加入溶于2 mL灭菌蒸馏水的溴化十六烷基三甲铵和萘啶酮酸，混匀，制成平板备用。
5.3 乙酰胺培养基
成分：乙酰胺   10.0 g
氯化钠 5.0g
无水磷酸氢二钾 1.39 g
无水磷酸二氢钾 0.73 g
硫酸镁（MgSO₄•7H₂O）      0.5 g
酚红 0.012 g
琼脂       20 g
蒸馏水    1000 mL
pH      7.2±0.2
制法：除琼脂和酚红外，将其他成分加到蒸馏水中，加热溶解，加入琼脂、酚红，121 ℃高压灭菌20 min后，制成平板备用。
5.4 胰酪大豆胨琼脂（TSA）
成分：胰酪胨   15.0 g
大豆蛋白胨 5.0 g
氯化钠 5.0 g
琼脂   15.0 g
蒸馏水     1000 mL
pH      7.3±0.2
制法：除琼脂外，将其他成分加到蒸馏水中，加热溶解，加入琼脂，121 ℃高压灭菌15 min后，制成平板备用。
5.5 绿脓菌素测定用培养基
成分：蛋白胨    20.0 g
氯化镁    1.4 g
硫酸钾   10.0 g
琼脂   18.0 g
甘油（化学纯）   10.0 g
蒸馏水   1000 mL
pH    7.4±0.2
制法：将蛋白胨、氯化镁和硫酸钾加到蒸馏水中，加热使其溶解，加入琼脂和甘油，加热溶解，分装于试管内，115 ℃高压灭菌20 min后，制成斜面备用。
5.6 硝酸盐蛋白胨水培养基
成分：蛋白胨   10.0 g
酵母浸膏 3.0 g
硝酸钾 2.0 g
亚硝酸钠 0.5 g
蒸馏水   1000 mL
pH    7.2±0.2
制法：将蛋白胨和酵母浸膏加到蒸馏水中，加热使之溶解，煮沸过滤后补足液量，加入硝酸钾和亚硝酸钠，溶解混匀，分装到加有小倒管的试管中，115 ℃高压灭菌20 min后备用。
5.7 明胶培养基
成分：牛肉膏 3.0 g
蛋白胨 5.0 g
明胶 120.0 g
蒸馏水   1000 mL
pH      7.4±0.2
制法：取各成分加到蒸馏水中浸泡20 min，随时搅拌加热使之溶解，分装于试管内，经115 ℃高压灭菌20 min后，直立制成高层备用。
5.8 普通琼脂斜面培养基
成分：蛋白胨   10.0 g
牛肉膏      3.0 g
氯化钠 5.0 g
琼脂   15.0 g
蒸馏水   1000 mL
pH      7.2±0.2
制法：除琼脂外，将其余成分溶解于蒸馏水中，加入琼脂，加热溶解，分装试管，121 ℃高压灭菌20 min后，制成斜面备用。
6 操作步骤
6.1 样品的稀释
按照微生物检验方法总则4.3制备1:10检液。
6.2 增菌培养
取1:10检液10 mL加到90 mL SCDLP液体培养基中，置36±1 ℃培养18~24 h。如有铜绿假单胞菌生长，培养液表面多有一层薄菌膜，培养液常呈黄绿色或蓝绿色。
6.3 分离培养
将增菌后的培养物，划线接种在CN琼脂培养基平板上，置36±1 ℃培养24~48 h。凡铜绿假单胞菌在此培养基上，其菌落扁平无定型，向周边扩散或略有蔓延，表面湿润，大部分菌落呈现蓝色或绿色。若菌落非蓝、绿色而在紫外光照射下发荧光，或菌落呈现红褐色而在紫外照射下不发荧光，亦为可疑菌落需进行后续鉴定实验。
在缺乏CN琼脂培养基时也可用乙酰胺培养基作为替代培养基进行分离，将增菌后的培养物划线接种于平板上，置36±1 ℃培养24~48 h，铜绿假单胞菌在此培养基上生长良好，菌落扁平，边缘不整，菌落周围培养基呈红色。
6.4 分纯
挑取CN琼脂培养基上的可疑菌落分区划线接种于胰酪大豆胨琼脂（TSA），于36±1 ℃培养18~24 h。
6.5 染色镜检
挑取TSA上可疑的菌落，涂片，革兰氏染色，镜检为革兰氏阴性者应进行后续鉴定试验。
6.6 氧化酶试验
取一小块洁净的白色滤纸片置于灭菌平皿内，用无菌接种环挑取铜绿假单胞菌可疑菌落，涂在白色滤纸片上，然后在其上滴加一滴新配制的1%二盐酸二甲基对苯二胺试液，若在15~30 s内出现粉红色或紫红色，为氧化酶试验阳性；若培养物不变色，为氧化酶试验阴性。铜绿假单胞菌为氧化酶试验阳性。
6.7 绿脓菌素试验
取可疑菌落2~3个，分别接种在绿脓菌素测定用培养基上，置36±1 ℃培养24±2 h，加入三氯甲烷3~5 mL，充分振荡使培养物中的绿脓菌素溶解于三氯甲烷液内，待三氯甲烷提取液呈蓝色时，用吸管将三氯甲烷移到另一试管中并加入1 mol/L的盐酸1 mL，振荡后，静置片刻。如上层盐酸液内出现粉红色到紫红色时为阳性，表示被检物中有绿脓菌素存在。
6.8 硝酸盐还原产气试验
挑取可疑的铜绿假单胞菌纯培养物，接种在硝酸盐蛋白胨水培养基中，置36±1 ℃培养24±2 h，观察结果。凡在硝酸盐胨水培养基内的小倒管中有气体者，即为阳性，表明该菌能还原硝酸盐，并将亚硝酸盐分解产生氮气。铜绿假单胞菌能够还原硝酸盐，结果为阳性。
6.9 明胶液化试验
挑取可疑的铜绿假单胞菌纯培养物，穿刺接种在明胶培养基内，置36±1 ℃培养24±2 h，取出放置于4±2 ℃冰箱10~30 min，如仍呈溶液状或表面液化时即为明胶液化试验阳性；如凝固不溶者为阴性。铜绿假单胞菌为明胶液化试验阳性。
6.10 42 ℃生长试验
挑取可疑的铜绿假单胞菌纯培养物，接种在普通琼脂斜面培养基上，置于42±1 ℃培养箱中，培养24~48 h，铜绿假单胞菌能生长，为阳性，而近似的荧光假单胞菌则不能生长。
6.11 其他鉴定方法
如使用生化鉴定试剂盒或微生物鉴定系统，可按生化鉴定试剂盒或微生物鉴定系统的操作说明进行鉴定。
7 检验结果报告
被检样品经增菌分离培养后，平板上有可疑菌落，并经证实为革兰氏阴性杆菌、氧化酶及绿脓菌素试验皆为阳性，即可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌；如绿脓菌素试验阴性而明胶液化、硝酸盐还原产气和42 ℃生长试验三者皆为阳性时，仍可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌。
此外，采用生化鉴定试剂盒或微生物鉴定系统所得出的阳性鉴定结果，亦可用于报告检出铜绿假单胞菌。
化妆品中铜绿假单胞菌的检验方法（征求意见稿）起草说明
为加强化妆品的监督管理，进一步提高化妆品使用安全性，国家药监局化妆品标准化技术委员会组织开展了《化妆品中铜绿假单胞菌的检验方法》的研究修订工作。现就工作有关情况说明如下：
一、起草原则
本标准规定了化妆品中铜绿假单胞菌的检验方法，适用于市面上常见的化妆品品类。为保证评价方法的科学性，本次验证在样品选择上涵盖了市场上常见的化妆品类别，同时组织3家实验室进行协作验证，充分考量了实测数据的可靠性、重复性和准确性。
二、起草过程
化妆品标准化技术委员会于2025年2月委托开展了《化妆品安全技术规范》（以下简称《规范》）中铜绿假单胞菌检验方法的修订工作。具体起草过程包括：拟定研究内容，修订铜绿假单胞菌检验方法，并完成实验室内方法学验证。2025年10月委托3家实验室开展实验室间方法学验证，修改完善形成标准草案。2026年3月25日，检验检测分技术委员会召开会议进行初审，初审结论为修改完善后同意结题，根据初审意见，修改完善了标题、文本格式、起草说明内容，并补充了油性样品的适用性实验等，形成该征求意见稿。
三、与我国已有相关标准的关系
目前我国铜绿假单胞菌的检验方法主要包括《中华人民共和国药典》、GB 8538-2022《食品安全国家标准饮用天然矿泉水检验方法》。
表1 国内主要相关标准列表

序号	来源国家或组织	标准号	标准名称	检测范围/适用基质	与制修订标准的关系
1	国家市场监督管理总局	GB 8538-2022	食品安全国家标准饮用天然矿泉水检验方法	食品	非等效
2	中国药典委员会	/	中华人民共和国药典	药品	非等效

四、与《规范》中原方法的对比情况
表2 与原方法的对比情况

序号	原方法	修订后	修订理由
1	定义：属于假单胞菌属，为革兰氏阴性杆菌，氧化酶阳性，能产生绿脓菌素。此外还能液化明胶，还原硝酸盐为亚硝酸盐，在42±1 ℃条件下能生长。	定义：属于假单胞菌属，为革兰氏阴性杆菌，氧化酶阳性，在42±1 ℃条件下能生长。大部分能产生绿脓菌素。	并不是所有的铜绿假单胞菌都有典型的生化特性。
2	无菌种	新增铜绿假单胞菌阳性质控菌株。	与总则、金黄色葡萄球菌、耐热大肠菌群等微生物标准保持一致。
3	十六烷基三甲基溴化铵琼脂培养基	修改为CN琼脂培养基配方。	将原配方修订为与GB 8538-2022一致。
4	在六烷基三甲基溴化铵琼脂培养基上培养24±2 h	修改为培养24~48h	国内外主流铜绿假单胞菌检验标准如GB 8538-2022、ISO均为24~48 h，《中国药典》和USP为18~72 h。考虑到部分铜绿假单胞菌荧光弱、色素浅，延长时间可以让其充分表达，防止漏检。保留原24 h的时限，如24 h内为阳性可直接报检出。
5	/	在分离培养后新增分纯步骤，再进行生化鉴定。	依据《中国药典》通则9204要求“微生物鉴定的第一步是待检培养物的分离纯化”增加分纯步骤，去除杂菌干扰，提高生化鉴定结果准确性。
6	/	增加“如使用生化鉴定试剂盒或微生物鉴定系统，可按生化鉴定试剂盒或微生物鉴定系统的操作说明进行鉴定。”	鉴于鉴定技术的发展，建议增加试剂盒方法和自动化鉴定系统。

五、国际相关标准情况
国际上主要的铜绿假单胞菌检验方法为ISO 22717：2015 Cosmetics — Microbiology — Detection of Pseudomonas aeruginosa和USP <62> MICROBIOLOGICAL EXAMINATION OF NONSTERILE PRODUCTS: TESTS FOR SPECIFIED MICROORGANISMS。
表3 国际主要相关标准列表

序号	来源国家或组织	标准号	标准名称	检测范围/适用基质	与制修订标准的关系
1	国际标准组织	ISO 22717:2015	Cosmetics — Microbiology — Detection of Pseudomonas aeruginosa	化妆品	非等效
2	美国药典委员会	USP<62>	MICROBIOLOGICAL EXAMINATION OF NONSTERILE PRODUCTS: TESTS FOR SPECIFIED MICROORGANISMS	药品	非等效

六、实验室验证情况
本次铜绿假单胞菌检验方法的修订，在系统比对不同标准中分离培养基配方的基础上，明确了方法所用培养基的具体配方。同时，针对各标准在生化鉴定方面的差异，本研究对原检验方法中生化鉴定组合进行了全面评估，以确定其能否满足检验要求。同时验证了包含水剂、膏霜、乳液、粉剂、油基、蜡基、彩妆类化妆品基质的方法适用性。在确定上述关键条件后，方法起草组拟定检验方法，并对该方法的专属性、检出限和适用性进行了系统验证，同时组织3家外部实验室开展实验室间验证，充分考察了实测数据的可靠性、重复性和准确性。
综合以上验证结果，本铜绿假单胞菌检验方法具备良好的适用性与重现性，可用于各类化妆品及牙膏产品的微生物检验工作。
七、其他应予以说明的事项
本方法体例主要参照《规范》微生物检验方法的体例，方便化妆品检验领域相关检验人员的阅读和使用。根据《化妆品标准形式和实施过渡期确定原则（试行）》，建议发布形式为纳入《规范》，实施过渡期为9个月。

（编辑天健华成）

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