2.5.4.3.3总铁结合量测定

2.5.4.3.3.1试剂

2.5.4.3.3.1.1 铁标准液

2.5.4.3.3.1.1.1 铬天青B铵盐法

2.5.4.3.3.1.1.1.1贮备液：(3mmol/L)取1.176g硫酸亚铁铵（6分子结晶水）置蒸馏水中，加50mL浓硝酸混匀反应10分钟，用蒸馏水定容至1000mL。

2.5.4.3.3.1.1.1.2 工作液：(30µmol/L)取10mL贮备液，用蒸馏水定容至1000mL。

2.5.4.3.3.1.1.2 原子吸收分光光度法

2.5.4.3.3.1.2.2.1贮备液：取1.0000g纯金属铁，用盐酸或硝酸溶解后，用0.1N盐酸稀释到1000mL，移入聚乙烯塑料瓶内，存放4^oC冰箱，1mL含1mg铁。

2.5.4.3.3.1.2.2.2 工作液：取10mL贮备液，用0.1N盐酸定容至100mL，1mL=100µg铁。

2.5.4.3.3.2 轻质碳酸镁（AR）（或碱式碳酸镁）其质量应符合要求。

2.5.4.3.3.3实验步骤

2.5.4.3.3. 3.1 应用铬天青B铵盐方法测总铁结合量   取0.1mL血清放入尖底离心管，加60µmol/l铁标准液0.1mL充分混合，室温放置15分钟。再加4－5mg轻质碳酸镁，放置15分钟，混合3－4次。然后以3000转/分离心5－8分钟，取上清液0.1mL按铬天青B铵盐比色法测血清铁的步骤进行操作，计算。

2.5.4.3.3. 3.2 原子吸收分光光度法测总铁结合量   取1.0mL血清，加铁标准液（20µg/mL）0.5mL，充分混合，放置15分钟。加150mg轻质碳酸镁，充分混匀1分钟以上，放置30分钟，混合3－4次。离心10分钟，取上清液1mL按原子吸收分光光度法测血清铁的操作步骤进行消化，测定，计算。

2.5.4.3. 3.4 计算

2.5.4.3. 3.4.1 血清总铁结合量可用（µg/100mL）表示。

2.5.4.3. 3.4.2 未饱和铁量 = 血清总铁结合量-血清铁。

 

                                    血清铁

血清蛋白运铁蛋白饱和度（％）=  ────────── ×100

                                    血清总铁结合量

 

2.5.4.3.4 数据处理及结果判定

实验数据可用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值< F0.05,结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05,P≤0.05,用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

 

结果判定

受试样品组与对照组比较，血清运铁蛋白饱和度升高经统计处理差异有显著性，即可判定该受试样品有升高血清运铁蛋白饱和度的作用。

 

2.5.4.4 红细胞内游离原卟啉：见1.6.2。

 

2.6 数据处理及结果判定：

试验数据为计量资料，可用t检验进行分析。凡自身对照资料可以采用配对t检验，两组均数比较采用成组t检验，后者需进行方差齐性检验，对非正态分布或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态方差齐后，用转换的数据进行t检验；若转换数据仍不能满足正态方差齐要求，改用t’检验或秩和检验；但变异系数太大（如CV>50％）的资料应用秩和检验。

结果判定：

改善儿童营养性贫血：试验前后自身比较和试验后组间比较，血红蛋白、红细胞内游离原卟啉二项指标差异有显著性；同时，试食组自身前后比较，血红蛋白平均升高幅度≥10g/L，可判定受试样品具有改善营养性贫血功能的作用。

改善成人营养性贫血：试验前后自身比较和试验后组间比较，血红蛋白指标差异有显著性；同时，试食组自身前后比较，血红蛋白平均升高幅度≥10g/L，血清铁蛋白、红细胞内游离原卟啉/血清运铁蛋白饱和度二项指标中一项指标阳性，可判定该受试样品具有改善营养性贫血功能作用。