1 动物实验

1.1 小肠运动实验

1.1.1 原理

经口灌胃给予造模药物复方地芬诺酯，建立小鼠小肠蠕动抑制模型，计算一定时间内小肠的墨汁推进率，来判断模型小鼠胃肠蠕动功能。

1.1.2 仪器和材料

1.1.2.1 仪器和试剂

手术剪、眼科镊、直尺、注射器、天平、活性炭粉、阿拉伯树胶、复方地芬诺酯。

1.1.2.2 试剂配制

1.1.2.2.1 墨汁的配制： 准确称取阿拉伯树胶100g，加水800mL，煮沸至溶液透明，称取活性碳（粉状）50g加至上述溶液中煮沸三次，待溶液凉后加水定容到1000mL，于冰箱中4℃保存，用前摇匀。

1.1.2.2.2复方地芬诺酯混悬液的配制：浓度为0.025%。

复方地芬诺酯片，每片含复方地芬诺酯2.5mg，取复方地芬诺酯片25mg（10片），用研钵研碎呈粉末后加水至100mL，临用前配制。

1.1.3 实验方法

1.1.3.1 实验动物

选用成年雄性小鼠，体重18－22g，每组10－15只。

1.1.3.2 剂量分组及受试样品给予时间

实验设三个剂量组，一个空白对照组和一个模型对照组。以人体推荐量的10倍为其中的一个剂量组，另设二个剂量组，必要时设阳性对照组。空白对照组和模型对照组同样途径给蒸馏水。受试样品给予时间7天，必要时可延长至15天。

1.1.3.3 实验步骤

1.1.3.3.1 模型的建立

给受试样品7天后，各组小鼠禁食不禁水16小时。

模型对照组和三个剂量组灌胃给予复方地芬诺酯（5mg/kgBW），空白对照组给蒸馏水。

1.1.3.3.2 指标测定的方法

给复方地芬诺酯后0.5小时后，低、中、高剂量组分别给予含受试样品的墨汁(含5%的活性炭粉、10%阿拉伯树胶)，对照组给墨汁灌胃。

25分钟后立即脱颈椎处死动物，打开腹腔分离肠系膜，剪取上端自幽门、下端至回盲部的肠管，置于托盘上，轻轻将小肠拉成直线，测量肠管长度为“小肠总长度”，从幽门至墨汁前沿为“墨汁推进长度”。

1.1.4 数据处理及结果判定

按下式计算墨汁推进率：

 

墨汁推进率需进行数据转换，X＝Sin^-1 ，式中P为墨汁推进率，用小数表示。在进行方差分析时，需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值< F_0.05,结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F_0.05,P≤0.05,用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

在模型成立的前提下，当受试样品组小鼠的墨汁推进率显著高于模型对照组的墨汁推进率时，可判定该项实验结果阳性。

 

1.2 排便时间、粪便粒数和粪便重量的测定

1.2.1原理

经口灌胃给予造模药物复方地芬诺酯，建立小鼠便秘模型，测定小鼠的首粒排黑便排便时间、5或6小时内排便粒数和排便重量，来反映模型小鼠的排便情况。

1.2.2 仪器和材料

1.2.2.1 仪器和试剂

眼科镊、注射器、分析天平、活性炭粉、阿拉伯树胶、复方地芬诺酯。

1.2.2.2 试剂配制

1.2.2.2.1 墨汁的配制 ： 同小肠推进实验。

1.2.2.2.2 复方地芬诺酯混悬液的配制 ：浓度为0.05%。

复方地芬诺酯片，每片含2.5mg复方地芬诺酯。

取复方地芬诺酯片50mg（20片），用研钵研碎后加蒸馏水至100mL，临用前配制。

1.2.3 实验方法

1.2.3.1 实验动物

选用成年雄性小鼠，体重18－22g，每组10－15只。

1.2.3.2剂量分组及受试样品给予时间

实验设三个剂量组，一个空白对照组和一个模型对照组。以人体推荐量的10倍为其中的一个剂量组，另设二个剂量组，必要时设阳性对照组。空白对照组和模型对照组同样途径给蒸馏水。如需要载体对照时，应同时增加样品的载体对照（阴性和模型对照）两个实验组。受试样品给予时间7天，必要时可适当延长至15天。

1.1.3.3 实验步骤

1.1.3.3.1 模型的建立

给受试样品7天后，各组小鼠禁食不禁水16小时。

空白对照组给蒸馏水，模型对照组和三个剂量组灌胃给予复方地芬诺酯（10mg/Kg BW）。

1.2.3.3.2 指标测定的具体方法

给复方地芬诺酯0.5小时后，空白对照组和模型对照组小鼠用墨汁灌胃，低、中、高剂量组给予含受试样品的墨汁(含5%的活性炭粉、10%阿拉伯树胶)，动物均单笼饲养，正常饮水进食。

从灌墨汁开始，记录每只动物首粒排黑便时间、5或6小时内排黑便粒数及重量。

1.2.4 数据处理及结果判定

资料可用方差分析，需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值< F_0.05,结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F_0.05,P≤0.05,用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

在小肠便秘模型成立的前提下，受试样品组小鼠的首粒排黑便时间明显短于模型对照组，即可判定该项指标结果阳性。

5或6小时内排黑便粒数明显高于模型对照组，即可判定该项指标结果阳性。

5或6小时内排黑便重量明显高于模型对照组，即可判定该项指标结果阳性。

1.2.5 结果判定：

5或6小时内排粪便重量和粪便粒数任一项结果阳性，同时小肠运动实验和排便时间任一项结果阳性，可判定该项实验结果阳性。

1.2.6注意事项:

1.2.6.1 实验中应将复方地芬诺酯悬液不断振荡，以保持其浓度均一。

1.2.6.2 墨汁配制时待阿拉伯胶加热透明后再加入碳末。

1.2.6.3 应去除小鼠排出第一粒黑便前的粪便。