2.2.3 实验方法

2.2.3.1 实验动物  成年小鼠或大鼠，小鼠体重18-22g，Wistar 或SD大鼠体重160-200g。推荐使用雄性小鼠。

2.2.3.2 剂量设计和分组  大鼠以人体推荐量的5倍为基本剂量。其余同1.1.3.2。

2.2.3.3 实验步骤

2.2.3.3.1 高尿素模型的建立及标本制备：末次给受试样品30min 后，在温度为30℃的水中不负重游泳90min ，休息60min后采血。大鼠采尾血，小鼠拔眼球采全血约0.5mL（不加抗凝剂）。置4℃冰箱约3h,血凝固后2000prn/min离心15min,取血清备用。血清中的尿素在室温下可稳定24h，在4-6℃可稳定7天以上。用二乙酰-肟法测定。

2.2.3.3.2 试剂盒操作步骤（本推荐使用的试剂盒适用于手工操作）

充分混匀，置沸水浴中煮沸10分钟，再于冷水中冷却。在520nm波长处（或绿色滤光板），以蒸馏水调零，测定各管吸光度值。

计算公式：

　　　　　　　　测定管光密度－空白管光密度

尿素（mg/dL）=-------------------------------------×标准液浓度值

　　　　　　　　标准管光密度－空白管光密度

 

　　　　　　　　测定管光密度－空白管光密度

尿素（m mol/L）=-----------------------------------×标准液浓度值÷2.8

　　　　　　　　标准管光密度－空白管光密度

 

标准液浓度值为20.0mg/dL。

 

2.2.3.3.3 自行配制试剂按下表操作：

充分混匀，置沸水浴准确15min，立即用自来水冷却。用波长520nm，以空白管调零，读取各管吸光度（A值）。

 

尿素含量计算

尿素（mmol/L）＝Au×10/As

尿素（mg/dL）＝Au×28.01/As

式中  Au－测定管吸光度

As－标准管吸光度

 

2.3 数据处理及结果判定

尿素数据为计量资料，可用方差分析,但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值< F0.05,结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05,P≤0.05,用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

若受试样品组血清尿素低于对照组，且差异有显著性，可判定该实验结果阳性。

2.4 注意事项

2.4.1 为避免色度转移，应在标本加入后30min 内读出吸光度值。

2.4.2 一般标本测定管反应后应澄清，严重脂血可制备血滤液重新测定。

2.4.3 煮沸时间应准确。