1 动物试验

1.1 原理 

    本方法是以高热量食物诱发动物肥胖，再给予受试样品（肥胖模型），或在给予高热量食物同时给予受试样品（预防肥胖模型），观察动物体重、体内脂肪含量的变化。

1.2 仪器

    动物天平，解剖器械等。

1.3 实验方法

1.3.1 实验动物 

    选用雄性大鼠，体重100－180g，每组8-12只。

1.3.2剂量分组及受试样品给予时间

实验设三个剂量组和一个空白对照组，以人体推荐量的5倍为其中的一个剂量组，另设二个剂量组，必要时设阳性对照组。受试样品给予时间30天，必要时可延长至45天。

1.3.3营养饲料配方：基础饲料 80％、猪油10％、蛋黄粉10％

1.3.4 实验步骤

1.3.4.1肥胖模型法

用营养饲料喂大鼠45天后，其体重增重比普通饲料喂养的同龄大鼠增加，差异有显著性，则肥胖模型建立。大鼠肥胖模型建立以后，将动物随机分为模型对照组及三个受试样品实验组，实验组给予不同剂量的受试样品，模型对照组给予相应溶剂。实验期间计录每只动物的给食量、剩食量及撒食量，定期称体重（每周称体重2次），实验结束时称体重，剖腹取体脂（睾丸及肾周脂肪垫）并称重，计算脂/体比。

1.3.4.2预防肥胖模型法

将动物随机分为空白对照组、模型对照组及三个受试样品实验组，自实验开始，模型对照组、实验组每只动物每日给予等量的营养饲料（饲料给予量以多数动物吃完为原则），空白对照组以相同方式给予基础饲料，饲料给予量与营养饲料相同。实验组给不同剂量的受试样品，对照组给予相应溶剂。实验期间计录每只动物的给食量、剩食量及撒食量，定期称体重（每周称体重2次），试验结束时称体重，剖腹取体脂（睾丸及肾周脂肪垫）并称重，计算脂/体比。

1.3.5.观察指标

体重、摄食量、食物利用率、体内脂肪重量（睾丸及肾周围脂肪垫）、脂/体比

1.4 数据处理和结果判定

一般采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值< F0.05,结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05,P≤0.05,用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。采用方差分析加Q检验进行统计。

实验组的体重和体内脂肪重量，或体重和脂/体比低于模型对照组，差异有显著性，摄食量不显著低于模型对照组，可判定该受试样品动物减肥功能实验结果阳性。

 

2 人体试食试验

2.1 原理

   单纯性肥胖受试者食用受试样品，观察体重、体内脂肪含量的变化及对机体健康有无损害。

2.2 仪器

    体成分测定设备、功率自行车、心率监测器、B超、皮卡钳、体重计。

2.3 试验方法

2.3.1 受试者纳入标准   

    受试对象为单纯性肥胖人群，成人BMI≥30，或总脂肪百分率达到男>25％，女>30％的自愿受试者。儿童及青少年实测体重超过标准体重的20％。

2.3.2 受试者排除标准

2.3.2.1 合并有心、肝、肾和造血系统等严重疾病，精神病患者。

2.3.2.2 短期内服用与受试功能有关的物品，影响到对结果的判断者。

2.3.2.3未按规定食用受试样品，无法判定功效或资料不全影响功效或安全性判断者。

2.3.3 试验设计及分组要求

不替代主食的减肥功能食品采用自身对照及组间对照试验设计。按受试者的体重、体脂重量随机分为试食组和对照组，尽可能考虑影响结果的主要因素如年龄、性别、饮食、运动状况等，进行均衡性检验，以保证组间的可比性。每组受试者不少于50例。替代主食的减肥功能食品只设单一试食组。

2.3.4 受试样品的剂量和使用方法

不替代主食的减肥功能食品：试食组按推荐服用方法、服用量服用受试产品，对照组可服用安慰剂或采用阴性对照。按盲法进行试食试验。受试样品给予时间35天，必要时可以延长至60天。

替代主食的减肥功能食品：受试者按推荐方法和推荐剂量服用受试样品，受试样品给予时间35天，必要时可以延长至60天。

2.3.5 观察指标

2.3.5.1 安全性指标

2.3.5.1.1 一般状况  包括精神、睡眠、饮食、大小便、血压等

2.3.5.1.2 血、尿、便常规检查

2.3.5.1.3 肝、肾功能检查

2.3.5.1.4 胸透、心电图、腹部B超检查（各项指标于试验前检查一次）

2.3.5.1.5 血尿酸、尿酮体

2.3.5.1.6 运动耐力测试：运动耐力测试方法为功率自行车试验。

    试食前后受试者以相同的运动方案做功率自行车试验，记录心率，并应用Astrand和Ryhming的列线图法间接测定每个受试者的最大摄氧量（L/分）。

2.3.5.1.7 其它不良反应观察：如厌食、腹泻等

2.3.5.2 膳食因素及运动情况观察

不替代主食的受试样品需对受试者试验开始前、结束前进行三天的询问法膳食调查，为排除饮食因素对试验结果的影响，要求尽可能与日常饮食相一致。

对试验期间受试者的运动状况进行询问观察，要求与日常运动情况一致。

2.3.5.3 功效性指标

2.3.5.3.1 体重，身高，腰围（脐周）、臀围，并计算体质指数（BMI），标准体重、超重度。

                 体重(kg)

成年人（BMI）＝───────

                 身高²（m²）

确定儿童、青少年标准体重，可参考1995年9省市儿童体格调查资料（首都儿科研究所）和2000年中国学生体质与健康调研报告（高等教育出版社）。

                 实测体重－标准体重

超重度（％） ＝───────────×100％

                      标准体重

                  

2.3.5.3.2 体内脂肪含量的测定

    体内脂肪总量和脂肪占体重百分率，用水下称重法或电阻抗法。

    皮下脂肪厚度用B超测定法或皮卡钳法，4个测定位点见下表

 

 

2.4 数据处理和结果判定

试验数据为计量资料，可用t检验进行分析。凡自身对照资料可以采用配对t检验，两组均数比较采用成组t检验，后者需进行方差齐性检验，对非正态分布或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态方差齐后，用转换的数据进行t检验；若转换数据仍不能满足正态方差齐要求，改用t’检验或秩和检验；但变异系数太大（如CV>50％）的资料应用秩和检验。

 

结果判定

不替代主食的减肥功能样品：试食组自身比较及试食后试食组与对照组比较，其体内脂肪重量减少，皮下脂肪四个点中至少有两个点减少，腰围与臀围之一减少，且差异有显著性（P<0.05），运动耐力不下降，对机体健康无不良影响，并排除膳食及运动对减肥功能作用的影响，可判定该受试样品具有减肥功能作用。

替代主食的减肥功能样品：试食组试验前后自身比较，其体内脂肪重量减少，皮下脂肪四个点中至少有两个点减少，腰围与臀围之一减少，且差异有显著性（P<0.05），运动耐力不下降，且对机体健康无不良影响，并排除运动对减肥功能作用的影响，可判定该受试样品具有减肥功能作用。