1 动物实验

1.1 动物选择

选用12月龄以上老龄大鼠或8-12月龄老龄小鼠，也可用25－30g成年小鼠造模。测定GSH、SOD指标时，可以选用正常成年动物。单一性别，小鼠每组10－15只，大鼠8－12只。

1.2 剂量分组及受试样品给予时间

实验设三个剂量组和一个空白对照组和一个模型对照组，以人体推荐量的5倍为其中的一个剂量组，另设二个剂量组，必要时设阳性对照组。受试样品给予时间30天，必要时可延长至60天。

1.3 实验方法

1.3.1 老龄动物

选用12月龄大鼠或8-12月龄小鼠，按血中MDA水平分组，随机分为1个老龄对照组和3个受试样品剂量组。每组大鼠单一性别8－12只，小鼠单一性别10－15只。3个剂量组给予不同浓度受试样品，对照组给予同体积溶剂，实验结束时处死动物测过氧化脂质含量、抗氧化功能酶活力。

1.3.2 过氧化损伤模型

1.3.2.1 D－半乳糖模型

1.3.2.1.1原理

D-半乳糖供给过量，超常产生活性氧，打破了受控于遗传模式的活性氧产生与消除的平衡状态，引起过氧化效应。

1.3.2.1.2造模方法

选三月龄健康成年小鼠，用 D－半乳糖40mg－1.2g/kgBW颈背部皮下注射或腹腔注射造模，注射量为0.1mL/10g，每日1次，连续造模6周，取血测MDA，按MDA水平分组。随机分为1个模型对照组和3个受试样品剂量组，另设1个空白对照组，3个剂量组经口给予不同浓度受试样品，模型对照组和空白对照组给予同体积溶剂，在给受试样品的同时，除空白对照组外，各组继续给予相同剂量D-半乳糖颈背部皮下或腹腔注射，空白对照组皮下注射生理盐水，实验结束处死动物测过氧化脂质含量和抗氧化功能酶活力。

1.3.2.2 辐照模型

1.3.2.2.1原理

电离辐射通过直接破坏生物膜中不饱和脂肪酸和间接通过水辐解产生自由基，引发脂类过氧化。

1.3.2.2.2造模方法

选18－22g健康成年小鼠，随机分5个组，1个空白对照组，1个模型对照组和3个受试样品剂量组，3个剂量组给予不同浓度受试样品，对照组给予同体积溶剂，30天后，除空白对照组外，各组给予5－8Gy⁶⁰C_oγ射线全身1次性照射，照射后第3、4天处死动物，取肝组织（或第9、10天处死动物，取睾丸组织）测过氧化脂质含量和抗氧化功能酶活力。

1.3.2.3 溴代苯模型

1.3.2.3.1原理

     溴代苯导致小鼠肝中毒，引起肝脂质过氧化。

1.3.2.3.2造模方法

    选18－22g健康成年小鼠，随机分5个组，1个空白对照组，1个模型对照组和3个受试样品剂量组，3个剂量组给予不同浓度受试样品，对照组给予同体积溶剂，实验30天后，动物饥饿过夜，给受试样品0.5-1小时后，除空白对照组外，各组灌胃0.16-0.47mg/kgBW溴代苯油，灌胃量0.2mL/20g，空白对照组灌胃同体积植物油，大约18－22小时后处死动物，取肝组织测过氧化脂质含量和抗氧化功能酶活力。

1.3.3 过氧化脂质（LPO）含量测定

脂质过氧化可以形成丙二醛、乙烷、共轭二烯、荧光产物及能产生化学发光的物质。如果这些产物在体液和组织中的含量增多，则表明体内脂质过氧化反应增强。

1.3.3.1 血中过氧化脂质降解产物丙二醛（MDA）含量测定

血中过氧化脂质降解产物丙二醛（MDA）含量可采用荧光法和比色法测定，方法任选其一。

1.3.3.1.1 荧光法

1.3.3.1.1.1 荧光法原理

MDA（malondiadehycle）是细胞膜脂质过氧化的终产物之一，测其含量可间接估计脂质过氧化的程度。1个丙二醛（MDA）分子与2个硫代巴比妥酸（TBA）分子在酸性条件下共热，形成粉红色复合物。以波长536nm为激发光，在550nm有最强荧光强度。可用荧光法进行微量测定。

1.3.3.1.1.2 仪器与试剂

仪器  荧光分光光度计、微量加样器、恒温水浴锅、普通离心机、混旋器、具塞离心管

试剂 

10mmol/L四乙氧基丙烷（贮备液，棕色瓶4℃保存12个月），临用前用纯水稀释成1nmol/mL

29mmol/L硫代巴比妥酸工作液

    硫代巴比妥酸        0.209g

    EDTA.2H₂0            25mg

    谷胱甘肽(还原型)     1mg

用0.02mol/L  NaOH  50 mL 溶解(微温助溶 ，棕色瓶4℃保存2周)

酸水解液

0.1mol/L H₂SO₄           125mL

0.1mol/L Na₂SO₄         125mL

加水150mL用 H₂SO₄ 调PH 1.5,加水稀释至500mL

正丁醇

以上所用玻璃器皿均需经50％硝酸浸泡24h后，再经蒸馏水、双蒸水淋洗干燥，试剂（选AR级）最好用双蒸水配制。