作者:佚名 文章来源:
不详 点击数: 更新时间:2007-9-10 14:10:06
1.3.3.1.2.3.3计算
B-A B-A
过氧化脂质含量(nmol/mL2:98溶血液)=── ×C×K =──×40
F-A F-A
A: 空白管吸光度
B:样品吸光度
F:四乙氧基丙烷吸光度
C:四乙氧基丙烷浓度(40nmol/mL)
K:稀释倍数
1.3.3.1.2.4数据处理及结果判定
一般采用方差分析,但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验,方差齐,计算F值,F值< F0.05,结论:各组均数间差异无显著性;F值≥F0.05,P≤0.05,用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计;对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换,待满足正态或方差齐要求后,用转换后的数据进行统计;若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的,改用秩和检验进行统计。
受试样品组与模型(或老龄)对照组比较,过氧化脂质含量降低有统计学意义,判定该受试样品有降低脂质过氧化作用,实验结果阳性。
1.3.3.2组织中过氧化脂质降解产物丙二醛(MDA)含量测定
1.3.3.2.1 原理
见1.3.3.1.2.1
1.3.3.2.2 仪器与试剂
仪器 721分光光度计、微量加样器、恒温水浴锅、普通离心机、混旋器、具塞离心管、组织匀浆器
试剂 见1.3.3.1.2.2
1.3.3.2.3 实验步骤
1.3.3.2.3.1 样品制备
组织匀浆样品:取一定量的所需脏器,生理盐水冲洗、拭干、称重、剪碎,置匀浆器中,加入0.2M磷酸盐缓冲液,以20000r/min匀浆10s,间歇30s,反复进行3次,制成10%组织匀浆(W/V),3000r/min离心5~10min,取上清液待测。
1.3.3.2.3.2样品测定
6试剂 |
空白管 |
样品管 |
标准管 |
10%组织匀浆 |
|
0.1mL |
|
40nmol/mL四乙氧基丙烷 |
|
|
0.1mL |
8.1%SDS |
0.2mL |
0.2mL |
0.2mL |
0.2M乙酸盐缓冲液 |
1.5mL |
1.5mL |
1.5mL |
0.8%TBA |
1.5mL |
1.5mL |
1.5mL |
H2O |
0.8mL |
0.7mL |
0.7mL |
混匀,避光沸水浴60min,流水冷却,于532nm比色 |
注:如用试剂盒,可按试剂盒的操作要求进行
1.3.3.2.3.3计算
B-A B-A 1
过氧化脂质含量(nmol/mg组织)=── ×C×K =──×40×────
F-A F-A 0.1×1000
B-A B-A 1 1
过氧化脂质含量 =─── ×C×K =───×40×─── ×────── ×100
(nmol/100mg蛋白质) F-A F-A 0.1 每克组织蛋白mg
A: 空白管吸光度
B:样品荧吸光度
F:四乙氧基丙烷吸光度
C:四乙氧基丙烷浓度(40nmol/mL)
K:稀释倍数
1.3.3.2.3.4 数据处理及结果判定
一般采用方差分析,但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验,方差齐,计算F值,F值< F0.05,结论:各组均数间差异无显著性;F值≥F0.05,P≤0.05,用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计;对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换,待满足正态或方差齐要求后,用转换后的数据进行统计;若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的,改用秩和检验进行统计。
受试样品组与模型(或老龄)对照组比较,过氧化脂质含量降低有统计学意义,判定该受试样品有降低脂质过氧化作用,实验结果阳性。