1.3 穿梭箱实验（双向回避实验）

1.3.1 原理：条件反射

1.3.2 仪器与试剂

仪器：大鼠穿梭箱。该装置由实验箱和自动记录打印装置组成。实验箱大小为50cm×16cm×18cm。箱底部格栅为可以通电的不锈钢棒，箱底中央部有一高1.2Cm 挡板，将箱底部分隔成左右两侧。实验箱顶部有光源和蜂鸣音控制器，自动记录打印装置可连续自动记录动物对电刺激（灯光或/和蜂鸣器）的反应和潜伏期，并将结果打印出来。

试剂：樟柳碱，环已酰亚胺，乙醇

1.3.3 实验方法

1.3.3.1 实验动物  Wistar 或SD大鼠，断乳鼠或成年鼠，雄、雌均可。

1.3.3.2 剂量设计和分组  同1.1.3.2。

1.3.3.3 实验方法及步骤

1.3.3.3.1受试样品对正常大鼠条件反射建立的影响

    将大鼠放入箱内任何一侧，20s 后开始呈现灯光或蜂鸣音，持续20s，后10s 内同时给以电刺激（100V，0.2mA，50Hz，AC）。大鼠在遭电击后即逃避，必须跑到对侧顶端，挡住光电管后才可中断电击，此为被动回避反应，在每次电击前给予条件刺激，反复强化后，大鼠在接受条件刺激后即跳向对侧并挡住光电管而逃避电击，此为主动回避反应，每隔天训练一回，每回50次，连续训练4－5回后，动物的主动回避反应率可达80－90%以上。根据打印结果分析如下指标：动物反应次数，动物主动回避时间，动物被动回避时间，动物主动回避率。停止训练5－50天内，分2－3次测定其记忆消退情况。

1.3.3.3.2 受试样品对记忆障碍模型大鼠条件反射建立的影响

1.3.3.3.2.1 模型制造:同1.1.3.3.2.1

1.3.3.3.2.2 操作方法:同1.3.3.3.1。

1.3.4 数据处理及结果判定

动物主动回避时间和被动回避时间为计量资料，可用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值< F0.05,结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05,P≤0.05,用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

若实验组主动和/或被动回避时间明显短于对照组，差异有显著性，可判定为该指标阳性。

1.3.5 注意事项  同1.1.5。

 

1.4 水迷宫实验

1.4.1 原理

    动物都有一种“探索”和“更替”倾向，当离开一个臂时，总是跑向“久”未跑过的“新”臂。小鼠不愿在水中，因而寻找能爬出水面的阶梯，训练后，小鼠能记住找到阶梯的路线。

1.4.2 仪器与试剂

水迷宫自动记录仪。该仪器是由迷宫游泳箱和自动记录仪两部分组成。迷宫游泳箱由聚乙烯塑料制成，长100cm、宽100cm、高30cm；内径长90cm、宽90cm、高30cm，泳道宽12cm，泳道走向固定。见附图。

1.4.3 实验方法

1.4.3.1 实验动物  推荐使用近交系小鼠，断乳鼠或成年鼠，单一性别，雌雄均可。

1.4.3.2 剂量设置、给样途径和期限  均同1.1.3.2。

1.4.3.3 实验方法

1.4.3.3.1 受试样品对正常小鼠记忆的影响

 

　　连续给样30天，末次给样次日开始训练。训练期间继续给样，每天一次。迷宫泳道水深9cm，水温约20℃（≮15℃）。将小鼠训练时间限定为120s，在120s内未到达终点的小鼠均记为120s。

　　第一次训练前将小鼠放在梯子附近，使其自动爬上3次。以后每次训练前将小鼠放在梯子附近，背朝楼梯，使其自动爬上1次。实验分阶段进行，视动物学习成绩逐步加长路程。第一次训练时用一挡板在A处档死，从A处开始训练，记录从A点到达终点的时间。第二次训练加长路程，从B处开始，此路程约训练3次，至动物数80％以上在2min内达到终点后再延长路程，分别记录各鼠每次从B点到达终点所需的时间和发生错误的次数（进入任何一个盲端一次均算一次错误）。末次测试从起点进行，将小鼠放在起点，记录从起点到达终点所需的时间和发生错误的次数。每次训练时，对2min内未达到终点的小鼠，应引导其到达终点，从终点的楼梯上来，达到训练的目的。每次训练或测验时均将头朝起始点。最后计算各组动物5次训练和测试的总错误次数，到达终点的总时间及2min内到达终点的总动物数（百分率），（包括了记忆获得和记忆巩固两个阶段的成绩）。停止训练5天后可在不同的时间从起点进行消退实验（记忆再现）。