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  • 功能学评价检验方法-调节肠道菌群功能检验方法 2
功能学评价检验方法-调节肠道菌群功能检验方法 2
附:肠道菌群检验用培养基和培养方法(动物和人体通用)
 
  项目      培养基         培养条件           鉴定方法              
肠杆菌   伊红美蓝琼脂     36±1℃培养24h    计数发酵乳糖、染色镜
                                              检为G杆菌的所有菌落
肠球菌   叠氮钠-结晶紫   36±1℃培养48h    计数有明显褐色圈、染
        -七叶苷琼脂                          色镜检为G+球菌的所有
                                              菌落               
双歧杆菌  BBL琼脂        36±1℃48h        食品卫生微生物检验
                            厌氧培养          双歧杆菌检验
                                              (GB报批稿)
乳杆菌    Lbs琼脂         36±1℃48h        G+无芽孢杆菌
                                              过氧化氢酶阴性
                                              API  CH50
产气荚    TSC琼脂         36±1℃ 24h       计数所有在紫外光下有
膜梭菌                      厌氧培养          荧光的黑色菌落
 
拟杆菌    改良GAM琼脂    36±1℃48 h       Gˉ无芽孢杆菌
                            厌氧培养           API 20A
 
 
培养基成分和制法
肠杆菌培养基(伊红美蓝琼脂 EMB )
成分
蛋白胨
10g
乳糖
10g
磷酸氢二钾
2g
琼脂
17g
2%伊红Y溶液
20mL
0.65%美蓝溶液
10mL
蒸馏水
1000mL
pH7.1
 
制法:
将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中,校正pH,分装于烧瓶内,121℃高压灭菌15min备用。临用时加入乳糖并加热溶化琼脂,冷却至50~55℃,加入伊红和美蓝溶液,摇匀,倾注平板。
 
肠球菌培养基(叠氮钠-结晶紫-七叶苷琼脂)
成分
多价胨
10g
酵母浸膏
5g
氯化钠
5g
磷酸氢二钾
4g
磷酸二氢钾
1.5g
叠氮化钠
0.5g
七叶苷
1g
0.05%结晶紫水溶液
0.4mL
柠檬酸铁铵
0.5g
琼脂
20~30g
蒸馏水
1000mL
pH8.0
 
制法:
将上述成分溶解于蒸馏水中,校正pH,分装后,121℃高压灭菌15min备用。
 
拟杆菌选择性培养基(改良GAM琼脂)
成分
标胨
15g
大豆胨
3g
消化血清粉
13.5g
酵母浸膏
5g
牛肉膏
2g
牛肝膏
1.2g
葡萄糖
3g
磷酸二氢钾
2.5g
氯化钠
3g
可溶性淀粉
3g
L—半胱氨酸
0.3g
硫乙醇酸钠
0.15g
胰蛋白胨
10g
琼脂
15~18g
蒸馏水
 
                      PH 7.2
 
制法:
1 将上述成分溶解于蒸馏水中,矫正PH,分装后,115℃高压灭菌15min,冷却至50℃左右,加入混合抗生素 1 mL/L,0.1%维生素K1溶液 1 mL/L,氯化血红素 2.5 mL/L,脱纤维兔血 70 mL/L,混匀后倾注平板。
2 混合抗菌素的配制:将卡那霉素 100mg、新霉素 100mg、万古霉素 1 mg 装入小瓶内,加入 1 mL无菌蒸馏水,充分溶解后,备用。
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