1 动物实验

1.1 原理

在一定时间内给予一定量的受试样品，用对胃粘膜有损伤作用的物质造成急性胃粘膜损伤模型，观察各剂量组胃粘膜的损伤程度；或用对胃粘膜有损伤作用的物质造成慢性胃溃疡模型，在一定时间内给予一定量的受试样品，观察各剂量组胃溃疡的面积和体积，反映受试样品对胃粘膜的保护作用。

1.2 实验动物：

选用Wistar或SD健康大鼠，单一性别，100－180克，每组8－12只。

1.3 剂量分组及受试样品给予时间

实验设三个剂量组，一个空白对照组。以人体推荐量的5倍为其中的一个剂量组，另设二个剂量组，必要时设阳性对照组。慢性溃疡模型应先造模，手术次日等动物苏醒后再分组。受试样品给予时间30天，必要时可以延长至45天。

1.4 胃粘膜损伤模型

1.4.1 急性胃粘膜损伤模型

1.4.1.1 实验动物：选用Wistar或SD健康大鼠。

1.4.1.2 实验器材及试剂：解剖器械，游标卡尺，酒精。

1.4.1.3 急性胃粘膜损伤模型：采用急性酒精损伤模型。实验方法：动物灌胃受试物30天，解剖前动物禁食不禁水24小时。实验结束当天灌胃受试物1h后再灌胃无水乙醇1.0mL/只，1h后处死动物，取胃于1%甲醛溶液中固定20分钟后，于立体显微镜底下观察胃粘膜的损伤情况或用游标卡尺测定胃粘膜损伤的程度。

游标卡尺测定胃粘膜损伤的程度：将固定后的胃沿胃大弯剪开，洗净胃内容物，将胃粘膜展开，胃粘膜损伤表现为腺胃区粘膜的条状出血，用游标卡尺测量出血条带的面积（精确到0.01mm），以出血带或溃疡面积作为损伤程度的评价指标。

1.4.2 慢性胃溃疡模型：

1.4.2.1 动物：选用Wistar或SD健康大鼠。

1.4.2.2 实验器材及试剂：带标尺的解剖镜、微量注射器，冰醋酸、半胱氨酸等。

1.4.2.3 实验方法：

1.4.2.3.1 损伤模型：可以用冰醋酸浸渍法、冰醋酸注射法等。

1.4.2.3.1.1 冰醋酸浸渍法：将禁食不禁水24小时后的动物乙醚麻醉，每鼠施行剖腹手术，将内径5mm、长30mm的玻璃管垂直放置于胃体部浆膜面上，向管腔内加入冰醋酸0.2mL ，1.5分钟后用棉签蘸出冰醋酸，缝合手术切口，术后正常饮食、水。第二天开始给药，连续给受试样品30天后。解剖取出胃，并用甲醛固定，测量溃疡面积，以溃疡面积作为评价损伤指标。

1.4.2.3.1.2 胃壁冰醋酸注射法：大鼠禁食40h后用1％的巴比妥钠麻醉，消毒腹部，于剑突下切开腹腔，将胃拉出腹腔外，用微量注射器于胃幽门处粘膜下注射30％的冰醋酸20mL/鼠，缝合切口。实验结束当天，禁食24h后处死，取出整个胃浸泡于1％的甲醛内，浸泡20min后沿胃大湾剪开，洗净为内容物，取腺胃区展开平铺于玻璃板上，用纸吸干溃疡内的水分，测量其面积和体积。

溃疡的面积和体积测量法：于带标尺的解剖显微镜下计数溃疡所占的方格数，换算成面积。然后用微量注射器将蓝墨水注入溃疡内，将溃疡填满至与周边平齐，读取微量注射器上所用墨水的刻度即为溃疡的体积。

1.4.3 消炎痛模型

1.4.3.1 实验动物：选用Wistar或SD健康大鼠。

1.4.3.2 实验器材及试剂：解剖器械或游标卡尺；消炎痛。

1.4.3.3 实验方法：

灌胃受试样品一段时间后，禁食24h后，给予消炎痛5mg/kgBW（配成溶液0.5mg/mL，灌胃），制作消炎痛胃粘膜损伤模型。给予消炎痛5h后处死大鼠，结扎幽门及喷门，向胃内注射生理盐水6mL，取胃置于1％甲醛液中浸泡15min，沿胃大弯剪开胃，用游标卡尺测量溃疡面直径，据此确定胃粘膜损失程度，分为1、2、3、4、5、10、15分。

评分标准：

4个以下的小溃疡或溃疡面直径小于0.5mm          1分

4～8个小溃疡或溃疡面直径为0.5～1.0mm          2分

9～16个小溃疡或溃疡面直径为1.0～2.0mm         3分

16个以上小溃疡或溃疡面直径为2.0～4.0          4分

溃疡面直径大于4mm                              5分

溃疡面直径大于10mm                             10分

溃疡面直径大于20mm                             15分

 

1.5 数据处理和结果判定

数据可用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值< F0.05,结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05,P≤0.05,用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

实验组与空白对照组进行比较，胃粘膜损伤面积或胃溃疡面积、体积或溃疡评分明显小于对照组，且统计学处理差异有显著性，则可判定该受试样品对胃粘膜损伤有辅助保护功能动物实验结果阳性。