1 动物实验

动物消炎实验可选大鼠棉球植入实验和大鼠足趾肿胀实验任一种。

1.1 大鼠棉球植入实验

1.1.1 实验原理

采用棉球等异物，动物局部皮下，可引起与临床某些炎症后期病理变化相似的肉芽组织增生。然后观察受试样品对肉芽肿重量的影响。

1.1.2 材料：手术器械、烘箱、天平、注射器

1.1.3 实验动物  推荐用大鼠，单一性别，150－220克，8－12只。

1.1.3.2 剂量分组及受试样品给予时间

实验设三个剂量组和一个空白对照组，以人体推荐量的5倍为其中的一个剂量组，另设二个剂量组，必要时设阳性对照组。受试样品给予时间30天，必要时可延长至45天。

1.1.5 实验步骤

大鼠在乙醚浅麻醉无菌条件下作切口，将已经称重棉球，经高压灭菌，每个棉球再加氨苄青霉素1mg/0.1mL，50°C烘箱烘干后，植入大鼠两测腋窝皮下（或两侧腹股沟皮下）。术后随机分为空白对照组和3个受试样品剂量组。受试样品各剂量组给于不同剂量的受试样品，空白对照组给予溶媒。实验结束当天再给一次受试样品，1小时后将大鼠断颈处死，剥离并取出棉球肉芽组织，于60－90°C烘箱内干燥1小时后称重，减去原棉球重量，即为肉芽肿净量。比较各剂量组与空白对照组肉芽肿重量。实验期限不少于30天，必要时可以延长。

肉芽肿净量（mg）＝干燥后棉球肉芽肿重量－原棉球重量

1.1.6 数据处理和结果判定

采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值< F0.05,结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05,P≤0.05,用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

实验组与空白对照组比较，肉芽肿净量明显下降，经统计处理差异有显著性，可判定该受试样品动物实验结果阳性。

1.1.7 注意事项

1.1.7.1 所用棉球重量可在10－50mg范围内，但同一实验，所用棉球重量应近似。

1.1.7.2 由于棉球的表面积对实验结果影响较大，故应使棉球形状和植入部位的形状一致以减少差异、

1.1.7.3 动物摄食量的降低和体重减轻，亦可降低肉芽重量，故应以mg（肉芽肿）/100g（体重）表示。

 

1.2 大鼠足趾肿胀实验

1.2.1 实验原理

用一定量的致炎剂，注入大鼠后肢足跖皮下，造成足跖肿胀，然后测定足跖部厚度，比较实验组和对照组足跖部厚度的变化。

1.2.2 材料：游标卡尺（精密度0.02mm）、微量注射器（50μL）

1.2.2 实验动物  同1.1.2。

1.2.3 剂量分组  同1.1.3

1.2.4 实验步骤

大鼠按体重分为空白对照组和3个受试样品剂量组，受试样品各剂量组给于不同剂量的受试样品，空白对照组给予溶媒。实验结束当天再给一次受试样品，1小时后，于大鼠右后足跖皮下注入1％角叉菜胶0.1mL/只（致炎剂可选角叉菜胶、琼脂、右旋糖酐等），分别在致炎后1、3、6小时，测量各鼠足跖部厚度，同一部位测量三次，取平均值。分别比较各剂量组和空白对照组不同时间点足跖部厚度的差异情况。受试样品给予时间30天，必要时可延长至45天。

 1.2.5 数据处理和结果判定

足跖厚度为计量资料，采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值< F0.05,结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05,P≤0.05,用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

以致炎剂刺激前后足跖厚度的差值变化来表示炎症反应的程度，实验组与空白对照组比较，任一时间点刺激前后足跖厚度的差值明显减少，差异有显著性，可判定该受试样品动物实验结果阳性。

1.2.6 注意事项

1.2.6.1 致炎剂若要注入足跖皮下，应将动物后肢拉直，针头刺入足趾中部皮下先向上注射一部分，再调转针头向下注射（共0.1mL）。

1.2.6.2 测量足跖厚度时，最好由专人来进行。卡尺紧贴足跖部，但不要加压，否则会影响测量结果。

1.2.6.3 每次测定的部位要固定。

 

2 人体试食试验

2.1 受试者的纳入标准

2.1.1 病史：慢性咽炎人群，主观症状有咽痛、咽痒、咽干、干咳、异物感、多言加重等。

2.1.2 检查：咽部粘膜水肿、粘膜充血、咽后壁淋巴滤泡增生、分泌物附着。

具有上述症状及至少一项检查所见即可纳入观察。

2.2 排除标准

2.2.1 慢性咽炎急性发作期或急性咽炎、声带结节、感冒或吸烟因素所至者。

2.2.2 鼻咽、咽、喉、鼻、喉、食管、颈部及结核、转移性肺癌病变所至者。

2.2.3 年龄在18岁以下或65岁以上者，妊娠或哺乳期妇女及对本品过敏者。

2.2.4 合并有心、脑血管、肝、肾和造血系统等严重疾病及精神病患者。

2.2.5 短期内服用与受试功能有关的物品，影响到对结果的判断者。

2.2.6 不符合纳入标准、未按规定服用受试样品的受试者，资料不全影响功效或安全性判断者。

2.3 试验设计及分组要求：采用自身和组间两种对照设计。按受试者的咽部症状、体征随机分为试食组和对照组，尽可能影响结果的主要因素如病程、年龄、性别等，进行均衡性检验，以保证组间的可比性。每组受试者不少于50例。

2.4 受试样品的剂量和使用方法：试食组按推荐服用方法、服用量每日服用受试产品，对照组可服用安慰剂，也可用具有同样作用的阳性物。受试样品给予时间15天，必要时可延长至30天。

2.5 观察指标

各项指标于试验开始及结束时各测试一次，并检查咽部，询问症状，记录变化情况。

2.5.1 安全性指标

2.5.1.1 一般状况  包括精神、睡眠、饮食、大小便、血压等

2.5.1.2血、尿、便常规检查

2.5.1.3肝、肾功能检查

2.5.1.4胸透、心电图、腹部B超检查（各项指标试验前检查一次）

2.5.2 功效性指标

2.5.2.1 症状观察

详细询问病史，主要咽部症状：咽痛、咽痒、咽干、干咳、异物感多言加重等，按症状轻重（1度、1分，2度、2分，3度、3分）计算积分，统计积分变化、症状改善率。

2.5.2.2  体征观察

咽部检查：咽部粘膜充血、粘膜水肿、咽后壁淋巴滤泡增生、分泌物等体征。

按检查结果轻、中、重分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级，分别记录试食前后体征变化，计算体征积分和改善率。

观察指标功效判定：

有效：症状减轻1度，咽部体征检查结果减轻I级

无效：症状、体征均无明显改变

2.6 数据处理和结果判定：

积分变化可用t检验进行分析。凡自身对照资料可以采用配对t检验，两组均数比较采用成组t检验，后者需进行方差齐性检验，对非正态分布或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态方差齐后，用转换的数据进行t检验；若转换数据仍不能满足正态方差齐要求，改用t’检验或秩和检验；但变异系数太大（如CV>50％）的资料应用秩和检验。

改善率为计数资料，可用X²检验，四格表总例数小于40，或总例数等于或大于40但出现理论数等于或小于1时，应改用确切概率法。

结果判定

试食后试食组自身比较及试食组与对照组组间比较，咽部临床症状、体征积分明显降低，且症状、体征改善率较对照组有明显增加，差异有显著性，可判定该受试样品具有清咽功能作用。