1           范围

本方法规定了以红景天为主要原料的保健食品中红景天苷和酪醇的液相色谱测定方法。

本方法适用于保健食品中红景天苷和酪醇的测定。

2           原理

试样经甲醇超声提取，以0.01mol/L乙酸铵-甲醇为流动相（80+20），采用高效液相色谱法，紫外检测器检测，根据保留时间定性，外标法定量。

3           试剂和材料

注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

3.1　试剂

3.1.1　乙酸铵（CH₃COONH₄）。

3.1.2　甲醇（CH₃OH）：色谱纯。

3.1.3　甲醇（CH₃OH）。

3.2　标准品

红景天苷、酪醇标准样品的分子式、相对分子量、CAS登录号见表1，纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

表1 红景天苷、酪醇标准样品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量

3.3　标准溶液配制

3.3.1　红景天苷标准储备液（2.0mg/mL）：准确称取红景天苷标准品20mg（精确至0.01mg）于10mL容量瓶中，用甲醇（3.1.2）溶解并定容至刻度，摇匀。

3.3.2　红景天苷标准工作液：将红景天苷标准储备液（3.3.1）用甲醇（3.1.2）稀释制备一系列标准溶液，标准系列浓度为0.00mg/mL、0.01mg/mL、0.02mg/mL、0.05mg/mL、0.20mg/mL、0.50mg/mL，临用时配制。

3.3.3　酪醇标准储备液（2.0mg/mL）：准确称取酪醇标准品20mg（精确至0.01mg）于10mL容量瓶中，用甲醇（3.1.2）溶解并定容至刻度，摇匀。

3.3.4　酪醇标准工作液：将酪醇标准储备液（3.3.3）用甲醇（3.1.2）稀释制备一系列标准溶液，标准系列浓度为0.00mg/mL、0.01mg/mL、0.02mg/mL、0.05mg/mL、0.10mg/mL、0.20mg/mL，临用时配制。

3.3.5　系统适用性溶液：量取红景天苷标准储备液（3.3.1）和酪醇标准储备液（3.3.3）各0.5mL于10mL容量瓶中，用甲醇（3.1.2）稀释至刻度，摇匀。

3.4　试剂配制

乙酸铵溶液（0.01mol/L）：称取0.77g乙酸铵，加入适量水溶解并定容至1000mL，经0.45μm滤膜（3.5.1）过滤后备用。

3.5 材料

3.5.1　水相微孔滤膜：0.45μm。

3.5.2　有机相微孔滤膜：0.45μm。

4           仪器和设备

4.1　高效液相色谱仪：配有紫外检测器（UV）。

4.2　超声波清洗器。

4.3　分析天平：感量为0.01mg和0.0001g。

5           分析步骤

5.1　试样制备

5.1.1　固体样品：准确称取已粉碎混合均匀的固体待测试样适量（约含红景天苷5mg）于 25mL容量瓶中，加入甲醇（3.1.3）约20mL，超声提取30min，放冷至室温，用甲醇（3.1.3）定容至刻度。混匀后经0.45μm滤膜（3.5.2）过滤，供液相色谱分析用。

5.1.2　液体样品：准确吸取摇匀后的待测试样适量（约含红景天苷5mg），置于蒸发皿内，水浴蒸干，用甲醇溶解并（3.1.3）转移至25mL容量瓶中并定容至刻度。混匀后经0.45μm滤膜（3.5.2）过滤，供液相色谱分析用。

5.2　仪器参考条件

5.2.1　色谱柱：C₁₈柱， 250mm×4.6mm， 5μm，或同等性能色谱柱；

5.2.2　流动相：乙酸铵溶液（0.01mol/L）-甲醇（80+20）；

5.2.3　流速：1.0mL/min；

5.2.4　柱温：25℃；

5.2.5　检测波长：215nm；

5.2.6　进样量：10mL。

5.2.7　系统适用性试验：取系统适用性溶液（3.3.5）10mL，注入液相色谱仪，记录色谱图，红景天苷峰与酪醇峰的分离度应大于1.5。

5.3　标准曲线的制作  

将红景天苷标准系列工作液（3.3.2）或酪醇标准系列工作液（3.3.4）分别注入高效液相色谱仪中，测定相应的色谱峰高或峰面积，以标准工作液的浓度为横坐标，以峰面积或峰高为纵坐标，绘制标准曲线（标准溶液液相色谱图见附录A中图A.1）。

5.4　试样溶液的测定

将试样待测液（5.1.1或5.1.2）注入液相色谱仪中，以保留时间定性，测得峰面积或峰高，根据标准曲线得到待测液红景天苷或酪醇的浓度（样品溶液液相色谱图见附录A中图A.2）。

6           结果计算

试样中红景天苷或酪醇含量按下式计算：

式中：

X—试样中红景天苷或酪醇的含量，单位为毫克每克或毫克每毫升（mg/g或mg/mL）； 

C—由标准曲线查得待测样液中红景天苷或酪醇的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；

V—样品的定容体积，单位为毫升（mL）；

m—样品量，单位为克或毫升（g或mL）。

计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保留两位有效数字。

7           精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

附录 A

标准溶液和试样溶液典型液相色谱图

图A.1 红景天苷和酪醇标准溶液（0.1mg/mL）色谱图

图A.2 含有红景天苷和酪醇的试样溶液色谱图